摘要：显色培养基是一种鉴定微生物的快速检测技术，它的原理是通过在培养基中加入微生物自身代谢生产的酶，根据相应显色底物反应的颜色对菌种进行判断与鉴定。显色培养基较传统培养基具有灵敏度高、特异性大的优点，是一种新型的分离培养。大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等这几种食源性致病菌已经有效、广泛应用于食品、环境卫生、医药等领域，取得了一定的成效。但显色培养基尚还存在一些假阳（阴）等问题，这就影响了检测的结果，因此还需要进一步的研究。
关键词：显色培养基；食源性致病菌；快速检测；应用
随着人们生活水平逐渐的提高和近年来一系列食品安全问题的出现，食品的安全问题越来越受到人们的重视。食品安全问题与微生物密切相关，微生物可造成食品环境的污染，因此，微生物的检测技术已经成为检测食品安全问题的重要工具。微生物传统的检测方法耗时长，操作步骤繁琐，已经不能满足当今食品、环境卫生、医药等领域检测的需要。研究各种新型微生物的检测技术，提高检测的效率是有效预防和控制各种微生物感染的有效措施[1]。本文就显色培养基在大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等食源性致病菌快速检测中的应用进行研究总结。显色培养基的原理是通过在培养基上加入微生物自身代谢产生的酶的底物，底物是由发色基团和微生物可代谢物质组成，为无色，但在特异性酶作用下游离出发色基团并显示一定颜色，直接观察菌落颜色，对菌种做出鉴定，减少了对菌株进行纯培养和进一步生化鉴定的步骤[2]。
1 几种食源性致病菌应用显色培养基快速检测的近况
1.1 显色培养基在大肠杆菌应用的研究 研究表明，绝大多数的大肠杆菌具有β-D-葡萄糖苷酸酶（β-D-Gud），利用β-葡萄糖醛酸酶分解底物，使色源游离出来显色而区分大肠杆菌和其它的细菌。沙门菌、志贺氏菌和耶尔森氏菌不能产生β-D-Gud，因此可以利用β-D-Gud底物有效检测大肠杆菌。底物被β-D-Gud水解后产生显色物质使菌落呈现特殊的蓝色或黄色。显色酶的底物通常是苯酚的衍生物，如有o （p） -硝基酚、p-硝基苯酚、羟基吲哚、5-溴- 4-氯- 3-吲哚、5-溴-6-氯-3-吲哚、6-氯-3-吲哚、N-甲基吲哚、5-碘-3-吲哚等的化合物[3]。
1.2 显色培养基在沙门氏菌应用的研究 沙门氏菌是一类重要的食源性致病菌，它能够产生辛酯酶，除沙雷氏菌属外，其它各属细菌不具备这一功能，因此可以鉴别沙门氏菌属和其它肠菌科细菌。根据这一原理，以丙烯乙二醇和5-溴-4-氯-3-吲哚-B-D半乳糖吡喃糖苷酸（X-GAL）为底物来检测沙门氏菌，沙门氏菌能水解乙二醇产酸，但不能水解X-GAL，在培养基上产生特殊的红色菌落。这种显色方法具有敏感性高、特异性高的特点，操作步骤较为简单、检测效率高[4]。
1.3 显色培养基在金黄色葡萄球菌应用的研究 金黄色葡萄球菌是食源性致病菌常见的食物中毒原因之一。金黄色葡萄球菌显色培养基是以DNA酶和凝固酶作为标记物，以甲苯胺蓝、甲基绿、丫啶橙和5-溴-4-氯-3-吲哚-胸苷-3-磷酸等为显色底物，根据菌落的颜色检测金黄色葡萄球菌。一般金黄色葡萄球菌显绿色菌落，且其周围培养基为黄色。金黄色葡萄球菌显色培养基具有较高的特异性和灵敏性，能够较好的消除假阳性。
1.4 显色培养基在弧菌应用的研究 弧菌广泛存在于水产品中，霍乱弧菌、副溶血性弧菌等是食品安全卫生的重点控制病原菌[5]。其步骤是取样品液加入SCPB肉汤或碱性蛋白胨水中，37℃增菌培养18～24h，分离，用接种环取1环增菌液，划线接种到副溶血性弧菌显色培养基上，划2个平板。弧菌显色培养基有蛋白胨、酵母膏粉、蔗糖、氯化钠、抑制剂、琼脂和混合色素。结果溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色，霍乱弧菌和其它弧菌显无色，其它细菌显黄色或无色且菌落很小。弧菌培养基具有特异性高的优点，有效的克服假阴性结果，是一种很理想的快速检测培养基。
1.5 显色培养基在李斯特菌应用的研究 李斯特菌是一种重要的食源性致病菌，其存在于肉类、禽类、乳制品等食品中。李斯特菌能够使新生儿患脑膜炎，成人患败血症等，是食品微生物的常检项目之一[6]。李斯特菌显色培养基的原理是利用β-D-葡萄糖苷酶和PI- PLC酶，加入相应的底物，放入培养基中，利用酶对底物的分解，产生荧光物质或显色物质。实验室显示，单增李斯特氏菌显蓝色，菌落周围有透明环。李斯特菌显色培养基具有快速定性鉴定和菌落数目的快速定量的优点。另一种PI-PLC酶的底物是5-溴-4-氯-3- 吲哚-肌醇-1-磷酸盐，致病的李斯特菌以此为底物设计显色培养基，结果培养基上呈现出绿色的菌落，无致病性李斯特菌为白色菌落。
2 显色培养基优点与缺点
显色培养基是检测微生物的一种新型的技术，其是根据菌落的颜色对菌种做出鉴定。显色培养基与传统的检测方法相比，具有特异性高、灵敏性高、耗时短、人力物力投入少的优点。国外对于显色培养基的研究较早，1974年法国CHROMagar公司就开始研究显色培养基的开发，目前已经研究出沙门氏菌、大肠杆菌、李斯特菌和弧菌等各种微生物的显色培养基[7]。后来，瑞士Biosynth公司、英国Oxiod公司、德国Merck公司等也相继研究出一系列显色培养基。
显色培养基虽然比传统的检测方法较好，但也存在一些问题：①运用显色培养基检测混合感染的微生物时，结果会出现假阳性或假阴性，这就降低目标微生物的检出率和显色培养基的敏感性和特异性。②在某些显色培养基中可能会出现不同的菌种，其菌落呈现出类似的颜色，或者是同一种微生物会呈现不同的颜色，因此需要进一步的观察菌落形态、显微检查才能对菌株作初步鉴定，这就需要专业人员的操作，而且延长了实验的时间。③显色培养基中加入抑制杂菌生长的物质，同时高浓度时会抑制目标菌的生长。④显色培养基在涂板后，由于不同时间孵育出的菌落呈现不同的颜色，因此需要检测人员把握好时间，才可提高阳性菌的检出率。
3 讨论
近年来，食品安全问题穷出不断，各种微生物引起食物中毒事假屡见不鲜，因此各地对食品安全问题越来越重视，随之微生物检测的技术也逐步的完善。传统的微生物检测方法繁琐、耗时长已经不能满足当前食品微生物的检测[8]。目前，国内外已经不断的研究检测的技术和改进检测的方法，研究新型的微生物检测技术是当前食品检测的趋势。本文就显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用进行研究与总结。研究显示，显色培养基将成为微生物检测技术的研究方向。但目前我国显色培养基的条件还不够完善，研究内容比较单一，有待于完善。现在我国市场上食品、医药卫生行业所用的显色培养基大部分都是国外的产品。为了提高国内微生物检测的技术水平，我国需要开发出具有自主知识产权的产品，以解决食品安全等问题的检测同时打破国外垄断市场的局面。
综上所述，目前显色培养基在也存在一些假阳性和假阴性等问题，因此需要对现有的显色培养基进行改造或开发新的显色培养基。我国显色培养基的研究开发应在国外的研究基础了进一步研究，寻找成本较低、使用方便、灵敏高效的显色培养基成品。
参考文献：
[1]徐潇，林兰，崔生辉，等.食品中致病菌常用检测技术分析[J].中国药事，2012，26（2）：185-190.
[2]高路，何聪芬，李萌，等.金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究进展[J].食品科学技术学报，2014，32（2）：51-55，71.
[3]廖茂彬，陈向标，赖明河，等.食品中菌落总数的国标法测定注意事项及微生物快速测试卡法检测[J].中国食物与营养，2013，19（7）：16-18.
[4]吴清平，韦献虎，张菊梅，等.吲哚酚显色底物的合成及其在微生物检测中的应用研究进展[J].化学通报（印刷版），2013，76（7）：580-589.
[5]张宾，邓尚贵，林慧敏，等.水产品病原微生物安全控制技术的研究进展[J].中国食品卫生杂志，2011，23（6）：581-586.
[6]张淑红，吴清平，张菊梅，等.显色培养基在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用研究[J].中国卫生检验杂志，2007，17（1）：43-45.
[7]张淑红，吴清平，张菊梅，等.显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用[J].微生物学通报，2006，33（6）：108-111.
[8]张然，董海强，张廷文，等.食源性微生物PCR检测技术研究进展及标准化讨论[J].山东轻工业学院学报（自然科学版），2010，24（4）：8-12.
编辑/王敏